إدخال جين بروتين الفلورسنت الأخضر باستخدام الناقل الفيروسي الأدينوفيروس في خلايا شبكية الدجاج في نظام زراعة عضوي نمطي
الكلمات المفتاحية:
نقل الجينات، الناقل الأدينوفيروسي، شبكية العين، زراعة الأنسجة، بروتين الفلورسنت الأخضر (GFP).الملخص
الضرر الذي قد يحدث للشبكية أثناء مرحلة النمو الجنيني قد يكون مرتبطاً بعدة أمراض بصرية مثل خلل تكون أو تحلل نسيج الشبكية. استخدام تقنية نقل جين محمل على فيروس ناقل إلى داخل خلايا شبكية العين قد يوفر إمكانية لاكتشاف بعض العلاجات لبعض هذه الأمراض. تصف هذه الدراسة استعمال نظام زراعة ثنائي الأبعاد لدراسة تأثير وفاعلية تقنية النقل الجيني على خلايا شبكية العين في جنين الدجاج.
جمعت عينات خلايا الشبكية المستخدمة في هذه الدراسة من أجنة عمرها 17 و19 يوماً، وزرعت في نظام زراعة خاص ومضبوط لمدة عشرة أيام، ولقد تم دراسة قدرة التضاعف للادينوفيروس الناقل – المحتوي على مبادر لجين سيتوميقالوفيروس – على إدخال جين بروتين الفلورسنت الأخضر إلى خلايا شبكية عين جنين الدجاج المزروعة.
أوضحت النتائج أن قطاعات نسيج الشبكية لم تظهر أية تغيرات في تركيبها السيتوبلازمي أثناء عملية الزراعة، بالإضافة إلى أن التعبير الجيني لجين بروتين الفلورسنت الأخضر كان في أعلى مستوياته بعد 24 ساعة من عملية إدخال الفيروس، وحافظ على نفس المستوى لعدة أيام. أظهرت أيضا الدراسة أن عملية حقن الأدينوفيروس لم تسبب أية تأثيرات مرضية لسيتوبلازم الخلايا تم دراسة هذه النقطة فقط عند المعدلات العالية من عملية نقل الفيروس.
النهج الذي تم تطويره هنا هو طريقة عملية تقنية قيمة يمكن أن تستخدم لتقييم الضرر الذي قد ينشأ عن الاستخدامات الدوائية على خلايا الشبكية، بالإضافة إلى آلية لنقل جينات علاجية فعالة إلى داخل شبكية العين، والتي قد تساعد البحث العلمي في فهم الآليات المسؤولة عن الأمراض المرتبطة بالنظر وابتكار طرق علاجية ممكنة لهذه الحالات.
التنزيلات
المراجع
Clark, A.F. and T. Yorio, Ophthalmic drug discovery. Nature Review 2003. 2: p. 448–459.
2. Kato, S., Negishi, K., Hayashi, Y., Miki, N., Enhancement of neurite outgrowth and aspartate-glutamate uptake systems in retinal explants cultured with chick gizzard extract. Journal of Neurochemistry, 1983. 40: p. 929-938.
3. Hoff, A., Hämmerle, H., Schlosshauer, B., Organotypic culture system of chicken retina. Brain Research Brain Research, 1999. 4: p. 237-248.
4. Rzeczinski, S., Victorov, I.V., Lyjin, A.A., Aleksandrova, O.P., Harms, C., Kronenberg, G., Freyer, D., Scheibe, F., Priller, J., Endres, M., Dirnagl, U., Roller culture of free-floating retinal slices: a new system of organotypic cultures of adult rat retina. Ophthalamic Research, 2006. 38: p. 263-269.
5. Caffé, A.R., Viser, H., Jansen, H.G., Sanyal, S., Histotypic differentiation of neonatal mouse retina in organ culture. Current Eye Research, 1989. 8: p. 1083-1092.
6. Johnson, T.V., Martin, K.R., Development and characterisation of an adult retinal explant organotypic tissue culture system as an in vitro intraocular stem cell transplantation model. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. , 2008. 49: p. 3503-3512.
7. Melani, A., et al., Selective adenosine A2a receptor antagonism reduces JNK activation in oligodendrocytes after cerebral ischaemia. Brain, 2009. 132: p. 1480-1495.
8. Stoppini, L., P.-A. Buchs, and D. Muller, A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. Journal of Neuroscience Methods, 1991. 37: p. 173-182.
9. Gähwiler, B.H., et al., Organotypic slice cultures: a technique has come of age. Trends Neuroscience, 1997. 20: p. 471-477.
10. Stokes, C.E.L., et al., Dynamics of a transgene expression in acute rat brain slices transfected with adenoviral vectors. Experimental Physiology, 2003. 88: p. 459-466.
11. Kluge, A., et al., Tracing of the entorhinal-hippocampal pathway in vitro. Hippocampus, 1998. 8: p. 57-68.
